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      醫(yī)用離心機(jī)常用的離心方法

      醫(yī)用離心機(jī)常用的離心方法


      一、差速離心法(又稱分步離心法) 采用不同的離心速度和離心時間,使沉降速度不同的顆粒分步離心的方法,稱為差速離心。操作時,將含有兩種不同顆粒的混懸液,以常速離心,使大的顆粒下沉,將上清液傾倒于另一離心管中,再加大離心力,離心一定時間,分離小的顆粒,反復(fù)多次分離,達(dá)到分離目的。差速離心主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。差速離心法的優(yōu)點是:操作簡單,離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開,并可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子;分離時間短、重復(fù)性高;樣品處理量大。缺點是:分辨率有限、分離效果差,沉淀系數(shù)在同一個數(shù)量級內(nèi)的各種粒子不容易分開,不能一次得到純顆粒;壁效應(yīng)嚴(yán)重,特別是當(dāng)顆粒很大或濃度很高時,在離心管一側(cè)會出現(xiàn)沉淀;顆粒被擠壓,離心力過大、離心時間過長會使顆粒變形、聚集而失活。

      二、速率區(qū)帶離心法:是根據(jù)分離的粒子在離心力作用下,在梯度液中沉降速度的不同,離心后具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)形成幾條分開的樣品區(qū)帶,達(dá)到彼此分離的目的。臨床常使用的分離液是Ficoll、Percoll及蔗糖。把靜脈血中單個核細(xì)胞分離出來,前一種分離液將血液中單個核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)分為一個層,同時提出。而Percoll分離液將血中淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞分為二個梯度層,分別提取。后者分離效果優(yōu)于前者,但操作繁瑣。


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