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      飼料中黃曲霉毒素B1檢測方法

      飼料中黃曲霉毒素B1檢測方法


      一、使用單位需自備的設備及試劑

      (1)儀器

      微孔板酶標儀(450 nm/630 nm)

      氮氣吹干裝置

      振蕩器

      離心機

      渦旋儀

      粉碎機

      電子天平(感量0.01 g)

      (2)器材

      單道微量移液器:20 μL~200 μL,100 μL~1000 μL

      多道微量移液器:30 μL~300 μL

      (3)試劑

      黃曲霉毒素B1試劑盒。


      二、溶液的配制

      樣本前處理需配制:

      配液1:樣品稀釋液:將濃縮樣品稀釋液用去離子水按1:9 體積比進行稀釋(1 份濃縮樣品稀釋液+9 份去離子水)。

      配液2:洗滌工作液:將濃縮洗滌液用去離子水按1:9 體積比進行稀釋(1 份濃縮洗滌液+9 份去離子水)。

      配液3:樣品提取液:用去離子水將甲醇按3 : 2 體積比進行稀釋(3 份甲醇+2 份去離子水)用于提取樣本中的黃曲霉毒素。


      三、樣本前處理方法

      樣本處理前須知:

      處理任何樣本時,都須注意:

      (1)實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭。

      (2)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必須使用潔凈實驗器具,以避免污染干擾實驗結果。


      樣本前處理步驟:

      (A)谷物(大米、玉米、小米等低脂含量)及配合飼料

      1. 取5 g 粉碎樣品,加入25 mL 樣品提取液;

      2. 充分振蕩混勻5-10 min;

      3. 4000 r/min 離心5 min,或用定量分析濾紙過濾;

      4. 取0.2 mL 離心后的上清液或過濾后的濾液加入到1 mL 樣

      品稀釋液中進行稀釋并充分混勻;

      5. 取50 μL 稀釋后的樣品待測。

      稀釋倍數:30

      (B)花生、花生餅等油脂高的飼料

      1. 取5 g 粉碎的樣品,加入20 mL 石油醚或正己烷和25 mL樣品提取液;

      2. 充分振蕩混勻5-10 min;

      3. 離心或靜置分層后去除上層液體;

      4. 取0.2 mL 下層液體加入到1 mL 樣品稀釋液中進行稀釋并充分混勻;

      5. 取50 μL 稀釋后樣品待測。


      四、酶聯免疫檢測步驟

      測定前須知:

      1、使用之前將所有試劑和需用微孔板回升至室溫。

      2、使用之后立即將所有試劑放回2~8 ℃。

      3、在使用中不要讓微孔干燥。

      4、在ELISA 分析中的重復性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA 測定程序中的要點。

      5、在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。


      測定步驟:

      1、將所需試劑和微孔板從冷藏環境中取出,在室溫下平衡30 min,每種液體使用前均須搖勻。注意標準液均需做2個平行試驗。

      2、加標準品:加標準品/樣本50 L 到對應的微孔中,再加入酶標記物50 L/孔,然后再加入50 L/孔抗體工作液,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光反應30 min。

      3、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩干,加洗滌液250μL/孔,每次浸泡15~30 s,充分洗滌4~5 次,用吸水紙拍干。

      4、顯色:加入底物液A 液50 μL/孔,再加底物液B 液50 μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境反應15 min。

      5、測定:每孔各加50 μL 終止液,設定酶標儀在450 nm 處,測定OD 值(建議用450/630 nm 雙波長檢測,在5 min內讀完數據)。



      TEL:13798128437

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